传代细胞培养的技术交流

Zhengye Biological

前言

传代细胞在兽用生物制品行业中具有非常重要的地位,它是非常重要的生产及检验原材料。没有了它们,有很多疫苗是无法生产出来的!没有了它们,即使疫苗能生产出来,也不能顺利的完成检验!今天小编就和大家交流一下传代细胞相关的培养要点以及一瓶合格的疫苗必须要具备的“基本素养”。

传代细胞有很多品系:如我们常见的Marc-145、Vero、PK-15、ST、MDBK、MDCK、F81、CRFK、DF-1等等,其培养方式分为纯悬浮培养,微载体培养,贴壁培养。今天我们就谈一谈最接地气的培养方式——贴壁培养。

我们大家都知道疫苗有活苗和灭活苗之分,灭活苗免疫安全性高,但是产生细胞免疫能力差,活疫苗含有低毒力的活的病原微生物,通过细胞培养的方式进行扩繁、浓缩、纯化等工艺制成。但是在猪场的实际使用过程中,经常出现疫苗免疫失败、出现免疫副反应或者爆发疾病的现象,让人苦不堪言。归其原因,很可能是因为基础种细胞在传代的过程中出现污染等原因造成的。今天小编就为大家分析一下细胞培养过程中细胞污染的几大可能原因:

第一、种细胞不纯净。在来时就已经染菌了,只染菌的数量少,没有体现出来,在不断的传代过程中,细胞增殖,细菌也在不断增殖。当细菌达到一定数量以后自然就表现出来,毁掉你苦心经营的细胞。所以企业在使用传代细胞前一定要提前做好检验,确定种细胞的纯净性方可用于大量扩繁。

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第二、因环境不合格而导致的。环境分为操作环境和培养环境,如果在你进行细胞传代时,你的生产区达不到净化级别,那么在敞口操作的过程中细菌非常容易落入培养瓶中,培养液中有很多营养物质,非常适合细菌迅速增殖。如果培养环境不达标的话,在培养过程中虽然培养瓶是紧闭的,但是瓶外可能会附着尘埃粒子或者细菌,在操作时对平身消毒不彻底,很可能细菌就被带入培养瓶中,在经过培养液的滋润,细菌自然会迅速繁殖,最后毁掉你的细胞!

第三、在传代过程中,使用的试验器材灭菌不完全,也可导致传代失败。切记高压灭菌的器材要在两日内用完,干热灭菌的器材要在三日内用完。

第四、操作技术不过关,麻痹大意是隐患。操作过程中不戴无菌手套或者不按要求进行手部消毒很容易感染细胞。

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第五、确保使用的培养液是无菌的。虽然很多实验室是外购的商品化培养基,但是商家也可能有百密一疏的时候。如果在少量生产时,同一瓶培养液被反复开盖使用,也有被污染的可能的,所以在这种情况下,建议你按照生产的计划提前一次性无菌分装到小的容器中,防止反复开口带来的隐患。

第六、使用的细胞分散液被染菌。如果单次使用量较小,建议提前分装到小容器备用,防止多次开盖造成污染。

第七、新生牛血清是传代细胞生产中的重要原材料,其营养成分高,易染菌,在使用前要进行抽检,确保无菌后,方可使用。如果用量小,那么建议分装成小瓶,备用。

以上是小编从事多年培养细工作总结出来几点细胞污染因素仅供大家参考,了解。可能还有没谈到的地方,或者有不当之处,欢迎一起交流。


更新时间:2019-04-20
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